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84農(nóng)業(yè)網(wǎng) 時(shí)間：2018-03-15 作者：佚名 來(lái)源：網(wǎng)絡(luò)整理
兔出血癥（Rabbithemorrhagicdisease，RHD）俗稱(chēng)兔瘟、兔出血熱，是由兔出血癥病毒（KabbitAcmorrhagicdiseasevirus，RHDV）引起的一種急性、高度傳染性、高致死性的疾病。以呼吸系統(tǒng)出血，實(shí)質(zhì)器官水腫、淤血及出血變化為特征。1984年2月，該病首先在我國(guó)爆發(fā)，隨后朝鮮、韓國(guó)、意大利、德國(guó)、印度、法國(guó)、前蘇聯(lián)、西班牙、日本、美國(guó)和非洲等國(guó)家和地區(qū)相繼有該病流行的報(bào)道.國(guó)內(nèi)外學(xué)者從形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)對(duì)該病毒進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。但在對(duì)BHDV基因組核酸性質(zhì)的研究上，曾經(jīng)發(fā)生長(zhǎng)期的爭(zhēng)論。國(guó)際病毒分類(lèi)委員會(huì)（ICTV）2000年最新的報(bào)告中將RHDV列入新成立的杯狀病毒科兔病毒屬。兔出血癥（RHD）在流行過(guò)程中有一個(gè)很特殊的現(xiàn)象，即該病主要侵害成年兔，幼兔反而不易感。從早年的流行病學(xué)資料看。3月齡以上成年兔發(fā)病率和致死率為90%～100%，2～3月齡家兔為80%左右，1～2月齡家兔為50%左右，1月齡以?xún)?nèi)幼兔很少發(fā)病。該病不僅僅對(duì)養(yǎng)兔業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且嚴(yán)重威脅瀕臨滅絕的野兔品種。
1RHDV的形態(tài)特征和基因組結(jié)構(gòu)
RHDV病毒粒子呈球型，直徑32～36nm，為20面體對(duì)稱(chēng)，無(wú)囊膜；病毒粒子的衣殼由32個(gè)高5～6nm的圓柱狀的殼粒構(gòu)成，核心直徑為17～23nm。采用低溫電鏡技術(shù)可觀察到180個(gè)衣殼蛋白形成位于2次軸上的90個(gè)殼粒，構(gòu)成T=3的20面體結(jié)構(gòu)，直徑為43nm。32個(gè)表面空洞位于5次軸和3次軸上，深度和寬度分別為6nm和8nm。90個(gè)弧狀殼�？梢苑譃锳和B兩類(lèi)。在A和B顆粒之間，可以清楚地看到有一密度條帶將兩者連接起來(lái)。
2RHDV的理化特性
RHDV在氯化銫中的浮密度為1.29～1.34g/平方厘米，沉降系數(shù)為85～162s。對(duì)乙醚、氯仿和pH3有抵抗力，能耐受50℃1小時(shí)的處理。RHDV能凝集人類(lèi)的各型紅細(xì)胞。王克領(lǐng)等研究發(fā)現(xiàn)，RHDV對(duì)O型、B型和AB型紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)快而強(qiáng)烈，HA效價(jià)很高（5×2E13～5×2E15）；而對(duì)A型紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)慢而弱，HA效價(jià)很低（5×2E1）。RHDV也能凝集綿羊、雞、鵝的紅細(xì)胞，但凝集能力較弱；不凝集其他動(dòng)物的紅細(xì)胞。N.RuvoenClouet等1995年報(bào)道：RHDV本能凝集臍帶和胎兒血紅細(xì)胞，認(rèn)為RHDV由位于人類(lèi)紅細(xì)胞表面的糖脂攜帶，而臍帶和胎兒血紅細(xì)胞表面無(wú)此物質(zhì)，同時(shí)認(rèn)為具有弱凝集性（羊等）的紅細(xì)胞表面有類(lèi)似的糖脂物質(zhì)。
現(xiàn)有結(jié)果表明，世界范圍內(nèi)的所有病毒分離株似乎均為同一血清型，借助于現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)手段尚不能將采自不同地區(qū)的分離株區(qū)分開(kāi)。Beminger等比較了采自意大利、韓國(guó)、墨西哥和西班牙分離株的血清型，發(fā)現(xiàn)僅存在微小的差異。
3RHDV的檢測(cè)
兔出血癥大多數(shù)為最急性和亞急性，發(fā)病后精神沉郁，呼吸團(tuán)難，很快死亡。剖檢可見(jiàn)死兔營(yíng)養(yǎng)狀況良好，但出現(xiàn)全身血液循環(huán)障礙，實(shí)質(zhì)器官充血、出血。根據(jù)這些特點(diǎn)可以初診，確診需經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查。
在病死兔的肝組織中含病毒量較多，實(shí)驗(yàn)室常用肝組織勻漿粗提物作為檢測(cè)的基本材料。現(xiàn)已建立的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法有：（1）血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)。該法利用了RHDV能凝集人類(lèi)紅細(xì)胞的特性，是一種常用和比較方便的方法，但有時(shí)會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性而且無(wú)法檢測(cè)到枝蛋白水解酶降解后的病毒顆粒。（2）間接血凝試驗(yàn)（IHA）。楊漢春用純化病毒，以戊二醛醛化綿羊紅細(xì)胞為載體，建立了間接血凝試驗(yàn)，用以檢測(cè)抗體效價(jià)。其敏感性比HI高32倍。（3）瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）。矯正德等用病死兔肝臟乳劑制備的凍融抗原對(duì)感染病毒的兔血清進(jìn)行試驗(yàn)，檢測(cè)出了沉淀抗體。（4）酶標(biāo)抗體技術(shù)。王啟明等采用雙抗體夾心法ELISA試驗(yàn)快速診斷本病，潘榮生等應(yīng)用雙抗體夾心法檢測(cè)出凍兔肉產(chǎn)品中的RHDV，孫智鋒等用單克隆抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)出未經(jīng)濃縮的肌肉樣品中的RHDV。（5）反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）。Gattre等以5’末喘衣殼蛋白基因?yàn)閷?duì)象設(shè)計(jì)了RT-PCR和套式RT-PCR，結(jié)果說(shuō)明本法比ELISA敏感104倍，可以檢出少至12個(gè)拷貝的病毒核酸。張英等用PCR技術(shù)也從病料中擴(kuò)增和檢測(cè)出RHDV。
另外GeimettiD等以地高辛配基標(biāo)記的RNA為探針通過(guò)原位雜交來(lái)檢測(cè)RHDV，發(fā)現(xiàn)注射RHDV8小時(shí)后便可在兔的肝臟檢測(cè)到病毒，而在脾臟無(wú)BNA的復(fù)制，病毒在肝臟復(fù)制后運(yùn)送至脾臟，在脾臟有成熟病毒粒子池，用此方法檢測(cè)RHDV比免疫組化法敏感性高。余銳萍等用乙型肝炎表面抗原地衣紅染色法檢測(cè)出RHDV，宋英今等用金銀染色三抗體夾心法檢測(cè)出兔出血癥病毒。
4RHDV的疫苗
由于兔出血癥病毒在體外組織細(xì)胞的培養(yǎng)方法尚未建立，目前廣泛使用的疫苗為組織滅活苗。但隨著家兔飼養(yǎng)成本的提高以及非免疫兔的減少，可用于制苗的肝組織日趨減少，使組織滅活苗的成本不斷增加，加之組織滅活苗可能導(dǎo)致散毒的缺點(diǎn)，近年來(lái)人們對(duì)RHDV疫苗的研究便主要著眼于基因工程疫苗。
BogaJ等將VP60的編碼序列插入酵母表達(dá)系統(tǒng)的5’與3’端的調(diào)空區(qū)之間，使之表達(dá)VP60類(lèi)似蛋白（VLP），該蛋白能夠?qū)ν卯a(chǎn)生保護(hù)作用。FischerL等將RHDV的VP60基因重組入金絲鵲病毒（僅僅在鳥(niǎo)類(lèi)中復(fù)制）的基因組中，使之表達(dá)重組蛋白VCP309，該蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)感染的兔有保護(hù)作用。2000年Fernandez等用李樹(shù)痘病毒為載體成功表達(dá)了VP60的結(jié)構(gòu)蛋白，并用表達(dá)VP60的李樹(shù)痘病毒感染植物的抽提物免疫家兔，效果顯著。
另外，最近研究的熱點(diǎn)之一是構(gòu)建重組病毒免疫兔，使其同時(shí)具有對(duì)多種病毒性疾病的免疫力。BarcenaJ等用減毒的粘液瘤病毒（MV）構(gòu)建了能表達(dá)VP60的重組病毒，表達(dá)出的VP60上還帶有可轉(zhuǎn)移的胃腸炎病毒（TGEV）的抗原決定簇。用該重組病毒通過(guò)皮下注射或口服途徑感染兔，可使之同時(shí)產(chǎn)生針對(duì)MV和RHDV的抗體；另外由于該重組病毒含有TGEV的抗原決定簇，表現(xiàn)出一定的水平轉(zhuǎn)移能力。Torres等對(duì)該重組病毒作為疫苗使用的安全性，在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行了評(píng)估，發(fā)現(xiàn)即便用100倍的試驗(yàn)劑量依然是安全的，未引起家兔的免疫耐受，對(duì)孕兔也未造成傷害。另外，還在野外一定限制區(qū)域內(nèi)對(duì)該疫苗的水平傳播能力進(jìn)行了測(cè)試，發(fā)現(xiàn)有50%未接種該病毒的兔得到免疫保護(hù)。從而為在野兔中大規(guī)模預(yù)防MV與RHDV提供了有效途徑。
RHDV作為一種新出現(xiàn)的傳染病且危害巨大，由于還不能在體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)，一定程度上阻礙了對(duì)此病的進(jìn)一步研究，一些性質(zhì)還不清楚。由于RHDV只感染兔和它的高度毒力，可以考慮應(yīng)用該病毒作為一些基因工程疫苗的載體。一些國(guó)家準(zhǔn)備將其作為控制野兔數(shù)量的生物手段，鑒于歷史教訓(xùn)及環(huán)境保護(hù)的要求，應(yīng)該慎之又慎。由于動(dòng)物出血性疾病對(duì)研究由病毒引起的人類(lèi)出血性疾病可以起模型作用，因此近年來(lái)對(duì)兔出血癥的研究趨于升溫。
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